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鸡卵泡颗粒细胞

鸡卵泡颗粒细胞

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产品概述 product description

细胞简介:鸡卵泡颗粒细胞分离自鸡卵泡组织;成熟卵泡是卵巢的组织结构成分之一,卵泡腔很大,卵丘很明显。卵泡内膜细胞紧靠卵泡颗粒层,与颗粒层细胞之间有一层基膜相隔,内膜细胞呈多边形,胞质清亮,胞核圆形,细胞间可见许多毛细血管,外膜细胞位于最外层,多呈梭形,与周围结缔组织分界不明显。卵泡(follicle)中卵母细胞四周有一层菱形或扁平细胞围绕,在卵泡开始发育、卵细胞成长的同时,周围的菱形细胞变为立方形,并由单层增生成复层,因其细胞浆内含有颗粒,故称为颗粒细胞。初级卵泡的颗粒细胞为单层;次级卵泡的颗粒细胞增至复层;成熟卵泡的颗粒细胞展开又变为单层。颗粒细胞的胞核大而圆,着色深,细胞的游离面有许多细长突起伸入放射带的凹陷部。

产品属性
产品名称:鸡卵泡颗粒细胞
组织来源:鸡卵泡组织
默认种属 三黄鸡,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基: 鸡卵泡颗粒细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 上皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传1代
消化液: 0.25%胰蛋白酶方法简介 实验室分离的鸡卵泡颗粒细胞采用先机械分离后胶原酶-胰蛋白酶联合消化法、并通过专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
质量检测
实验室分离的鸡卵泡颗粒细胞经FSHR免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。验。
方法简介
实验室分离的鸡卵泡颗粒细胞采用先机械分离后胶原酶-胰蛋白酶联合消化法、并通过专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
1、实验动物选择健康产蛋期母鸡,实验前禁食12h。
2、备好试剂与仪器:2% EDTA-2Na溶液、含双抗的PBS缓冲液、0.2% Ⅱ型胶原酶、M199完全培养基(含5%FBS及1%双抗)、200目不锈钢筛、37℃恒温水浴锅、CO₂恒温培养箱等。
二、取材与预处理
1、翅下静脉注射2mL 2% EDTA-2Na溶液处死母鸡,用新洁尔灭浸泡消毒5min,无菌操作打开腹腔,剪取完整卵巢,剥离8-15g的健康卵泡,放入预冷的含双抗PBS缓冲液中。
2、用加双抗的PBS反复漂洗卵泡3次,彻底去除血污,剥净卵泡外膜、结缔组织及表面血管网。
三、细胞分离与消化
1、用手术刀在卵泡表面快速划1-2cm切口,完全释放卵黄,用PBS反复漂洗至无明显卵黄残留,留下卵泡膜(基膜+颗粒细胞层)。
2、将卵泡膜剪碎,加入4mL培养基,用1mL移液枪反复吹打1min,自然沉降5min后收集上清液。
3、向沉淀中加入4mL 0.2% Ⅱ型胶原酶重悬,37℃水浴消化30min,每5min震荡一次,消化完成后加入4mL含10%血清的M199培养基终止消化。
四、纯化与接种培养
1、用200目不锈钢筛过滤消化液,收集滤液后1200rpm离心5min,弃上清。
2、用M199培养基洗涤细胞沉淀2次,每次1200rpm离心5min,最后用完全培养基重悬细胞。
3、将细胞悬液接种至6孔培养皿,置于37℃、5% CO₂培养箱静置培养,12-24h首次换液,之后每2-3天换液一次,待细胞生长融合后即可开展后续实验。